质粒转化的原理和步骤(质粒转化)

摘要 大家好,精选小编来为大家解答以上问题。质粒转化的原理和步骤,质粒转化很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、首先将一个0 1cm的电

大家好,精选小编来为大家解答以上问题。质粒转化的原理和步骤,质粒转化很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、 首先将一个0.1cm的电击杯放在冰上预冷,将冷冻的感受态细胞从冰中取出溶解。

2、 然后,向100微升感受态细胞中加入1微升纯化的连接溶液或0.5微升未纯化的连接溶液,小心混合并置于冰上20分钟。

3、 然后,将混合物加入预冷的电击杯中,擦干杯外的水以防电火花,放入电转换器的反应槽中,接通电源。

4、 然后点击BioRad电转器,3kv,200电阻,25微F,0.2电转器杯,时间常数在4.5-5 ms之间。

5、 然后,听到蜂鸣声后,迅速向电击杯中加入1ml37的37SOC液体培养基,洗出混合液,转移至1.5ml离心管中。

6、 最后复苏,37220-250转/分钟培养1小时,使其充分表现抗性,取适量包被平板,将平板倒置于培养箱中,37培养16-24小时。

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